求专业转染试剂转染Raw264.7小鼠巨噬单核细胞

哪位可以分享转染raw 264.7细胞经验？

为了转染raw 264.7小鼠巨噬单核细胞我们实验室尝试了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它转染试剂，对于我们8000bp的质粒DNA基本转染后都没有荧光信号；师兄在中山大学的同学给我们推荐了他们实验室用Zeta Life Advanced DNA RNA货号AD600050转染raw 264.7细胞经验分享。

按照中山大学师兄给出的方法并结合我实验室情况我把自己在6孔板转染raw 264.7细胞的相关经验整理如下，希望对你转染raw 264.7细胞有一定的帮助，下面是我首次用转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片，后期进一步优化后的新图片我也会随后呈上：

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent AD600050转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项：

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等转染试剂；

2细胞培养基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;

有哪位做过RAW264.7巨噬细胞的转染吗

请先把细胞养好，我实验室用Advanced Transfection Reagent转染试剂AD60015做了24孔板转染RAW264.7小鼠单核巨噬白血病细胞的转染，转染体系大概总结如下 转染质粒DNA：pcDNA3.1-GFP 质粒DNA大小：8000bp 转染完全培养基用量：500ul 转染试剂用量：2.5ul 转染细胞密度：80%

关于RAW264.7巨噬细胞转染的问题

跟您细胞的状态有关，RAW246.7是单核-巨噬细胞，如果培养条件不好，就容易被诱导分化，这也直接影响转染效率，我们实验室一般都会选择RFect-siRNA瞬时转染，本身RAW264.7巨噬细胞也是比较皮实的,比普通贴壁细胞略微难度要大一点。

请问各位高手用什么转染试剂转RAW264.7转染效率比较高啊？

请先把细胞养好，我实验室用Advanced Transfection Reagent转染试剂AD60015做了24孔板转染RAW264.7小鼠单核巨噬白血病细胞的转染，转染体系大概总结如下 转染质粒DNA：pcDNA3.1-GFP 质粒DNA大小：8000bp 转染完全培养基用量：500ul 转染试剂用量：2.5ul 转染细胞密度：80%

用那种方法可以提高RAW 264.7细胞转染效率？

在6孔板中用Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂高效率转染RAW 264.7细胞方法总结。

实验方案如下：

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），

二、操作流程

1、先将细胞接种到6孔板细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced DNA RNA AD600150转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，后期会进一步摸索此条件）。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

下图是转染raw 264.7细胞的荧光和明场图片

三、RAW 264.7细胞简述：

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞. 此细胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。