Taq聚合酶的稳定性加速周期计算

PCR反应中使用的Taq聚合酶的有什么特点

Taq聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶, Taq聚合酶的缺点之一为催化DNA合成时的相对低保真性。 它缺乏3’→5’核酸外切酶的即时校正机制，出错率为1/9000。 不过PCR的反应都是在冰上进行的， Taq聚合酶也是比较容易降解的，是最后一步加入的。 请采纳

Taq DNA聚合酶问题

大部分耐热性DNA聚合酶在PCR反应时都有在PCR产物的3'末端添加一个“A”的特性。这一步往往在72℃ 10分钟过程产生，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。

taqdna聚合酶每分钟可延伸多长的片段

常见的Taq酶按照说明书每分钟可扩增1000-2000bp，实践表明扩增速度比这个还快些。

PCR反应中使用的Taq聚合酶的有什么特点

Taq聚合酶是一种耐热的DNA聚合酶, Taq聚合酶的缺点之一为催化DNA合成时的相对低保真性。 它缺乏3’→5’核酸外切酶的即时校正机制，出错率为1/9000。 不过PCR的反应都是在冰上进行的， Taq聚合酶也是比较容易降解的，是最后一步加入的。 请采纳

聚合酶链式反应的循环参数

（Initial denaturation）
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。 循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可 缩短该步骤时间
变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。 （Primer annealing）
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。
退火温度对PCR的特异性有较大影响。 引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略
延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。 （70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。如图所示：现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。 PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合（复性）可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。